精子DNA損傷檢測試劑-甲苯胺藍染色法備

甲苯胺藍是一種經典的細胞核（陽離子）染料。 甲苯胺藍不僅含有兩個發色團,還含有兩個助色團,為堿性染料總體呈負電荷。甲苯胺藍中的陽離子有染色作用， 正常的精子核的主要核蛋白與其中的陽離子相結合而被染成淡藍色；而染色質異常的精子核含有較多的魚精蛋白等物質遇到甲苯胺藍可呈異染性，染成深藍色或紫紅色。

 

主要組成成分：甲苯胺藍、乙醇、磷酸鹽緩沖液。
儲存條件及有效期：4-6℃保存一年。
適用儀器：常規顯微鏡。
樣本要求：新鮮精液。
【檢驗方法】
實驗前的試劑準備：
⑴.C液（固定液）由C1液和C2液等量混合，并在4℃下冷卻至少30min。
 ⑵.G液（染色液）：用前由9.5ml E液（染色稀釋液）和0.5ml F液（染色儲存液）混合而成。

1．精液液化后，用A液（洗滌液）與精液樣本混合均勻，2400rpm離心10分鐘，棄去上清，留下精子沉淀團，再用B液（標本稀釋液）調節濃度至200 x 106個/ml。
2．然后在干凈的載玻片上制備薄涂片，待玻片自然干燥后，浸泡C1液30min，再用C2液清洗，然后空氣干燥30分鐘。
3．干涂片用C液（固定液）于4℃環境下固定30min，待空氣自然干燥12小時后，滴加D液（變性液）覆蓋玻片并在4℃下孵育5min。
4．用蒸餾水漂洗3次，每次1min，之后在室溫下用G液（染色液）染色5min，流水輕輕沖洗，空氣干燥。
5．在油鏡下分析計數200個精子細胞，染色質完整的細胞(TB-)顯淡藍色，染色質完整性降低的細胞（TB+）顯深藍色或紫色。如下圖：
【參考值】TB+細胞＞45%：精子染色質完整性差。
【注意事項】精子染色液試劑盒為體外診斷試劑，染色結果僅供臨床參考。
產品編號：GC-TB-20  20人份